从ROSA26说起

20 世纪 90 年代末 Philipe Soriano 及其同事发现，一个被命名为 ROSAβgeo26 的随机转基因小鼠品系在所有组织中都能检测到高水平的β半乳糖苷酶表达。他们对这种转基因小鼠进行了基因插入的定位，确定了在第6号染色体的基因整合，也就是我们现在常说的Rosa26位点。

Rosa26位点位于小鼠6号染色体，是一个非编码基因，已被证明在大部分组织和细胞中都有表达。表达比较活跃的基因区域因为需要转录因子的进入基因组结构不会被异染色质化，因此在这个区域定点插入外源DNA，在各组织中表达的可能性都非常高。所以，Rosa26被广泛用来作为外源基因表达的安全位点。

其他的safe harbor位点

安全港位点除了Rosa26位点还有H11、TIGRE、Col1a1位点。

H11位点

H11位点（也叫Hipp11）位于小鼠第11号染色体，是 Eif4enif1与Drg1 这两个基因之间的一个位点，由 Simon Hippenmeyer于2010 年发现并命名。由于H11位点位于两个基因之间，故外源基因插入后影响內源基因表达的风险很小。同时H11位点所在的Eif4enif1与Drg1这两个基因的侧翼序列区域具有广泛的空间和时间EST（expression sequence tag）表达模式，能够使整合在此的外源基因受指定启动子的驱动而稳定表达。该位点的纯合敲入小鼠可正常发育和繁殖。因此成为可与Rosa26位点相媲美的新「Safe Harbor」。

Col1a1位点

Col1a1位点是2006年由Caroline Beard首先使用作为四环素诱导调控外源基因表达的整合位点。Col1a1位点实际上位于第11号染色体的Col1a1基因3‘UTR下游约500bp左右。在四环素调控模型中，在TetO启动子之前往往加上SA-polyA来阻隔上游启动子的影响，防止不依赖于四环素的转录调控。

TIGRE位点

TIGRE是 tightly regulated 的缩写，也是一个适用于四环素调控的整合位点，位于小鼠第9号染色体AB124611 和 Carm1两个基因之间。和Col1a1位点类似，最好在TetO-cDNA-polyA两侧加上隔离子来减少不依赖于四环素的本底表达。

对基因工程的启示

除了小鼠之外，越来越多的转基因生物被开发利用服务人类生活，比如说CHO细胞的Knock-in用于制备蛋白药物，目前大多数项目都是用随机整合的方式。无论是线性化载体的随机整合还是基于转座子系统的整合，整合位点都是在基因组上均匀分布，对基因组的稳定性有影响，而且可能打断正常基因。使用一个或多个safe harbor位点做定点敲入，理论上会使细胞的遗传稳定性更强，代谢的可预测性也更强。
reference: https://zhuanlan.zhihu.com/p/83335395